Caracterizacion-de-glucogeno-2.doc

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS Práctica 7: Obtención de glucógeno a partir de hígado de una rata Integrantes: Franco Hernandez Erika Jayet Olivar Jorge Luis INTRODUCCIÓN El glucógeno es el principal polisacárido de reserva de las células animales y al igual que la amilopectina es un polisacárido ramificado de la D-glucosa con enlaces alfa-1,4 y alfa-1,6 en los puntos de ramificación, pero es mucho más ramificado y compacto que ésta. El glucógeno es abundante en el hígado, donde puede alcanzar hasta el 7% del peso húmedo, pero también se le halla en músculo esquelético. En las células hepáticas el glucógeno se encuentra almacenado en gránulos grandes que contienen además las enzimas responsables de su síntesis y degradación. El glucógeno puede hidrolizarse por la acción de alfa-amilasa que se encuentra en la saliva y jugo pancreático, las cuales rompen los enlaces alfa-1,4 en las ramas exteriores del glucógeno para dar glucosa, una pequeña cantidad de maltosa y un núcleo resistente llamado dextrina limite. OBJETIVOS 1. Llevar a cabo una hidrolisis ácida y una enzimática al glucógeno aislado. 2. Caracterizar el glucógeno aislado y comprobar su pureza.

Grupo: 4QM2 Sección: 1

RESULTADOS Tabla 1. Caracterización glucogeno. Prueba Molish

del

Observación Anillo Violeta en el fondo Azul Negativo

Biuret Ninhidri na Lugol

Rojizo

Tabla 2. Caracterización de la hidrolisis del glicógeno mediante pruebas para carbohidratos. Hidrolisi s

Acida 1 N

Fehling

+

Lugol Seliwan of

-

2 N + + + +

T 4N

Enzimá tica A

B

Bla nco Agu a

++ + -

-

-

-

-

+

+

+

-

++

-

++

+

-

DISCUSIÓN Prueba de Molish: Dio a una prueba positiva tras la formación de un furfural, pues es un carbohidrato el cual condenso dando un producto violeta. Biuret: Resulto una prueba negativa, lo que nos indica que el glucógeno obtenido está libre de proteínas o péptidos. Ninhidrina: Esta prueba es negativo dado que el glucógeno no presenta grupos amino en su estructura como las proteínas o aminoácidos. Lugol: Se presentó una coloración cafénaranja para la solución de glucógeno sin hidrolizar; arrojando una prueba positiva e indicando que es un polisacárido ramificado. En tanto dicha

prueba pero con solución de glucógeno hidrolizado con ácido el resultado fue negativo, pero con el tubo testigo y los dos con enzima el resultado fue positivo, demostrando que la actividad enzimática no es suficiente para degradar completamente la molécula de glucogeno. Fehling: Esta reacción se lleva a cabo en un medio alcalino por lo que fue necesaria la adición de NaOH al 40% para la neutralización del HCl utilizado en la hidrolisis del glucógeno. En esta prueba nos dio negativo para los tubos 4, 5 y 6, esto indica que la hidrolisis enzimática no es suficiente para generar moléculas con extremos reductores. En tanto para los tubos 1, 2 y 3 hidrolizados con HCl 1N, 2N, y 4N respectivamente nos dio positivo pues la hidrolisis acida rompe enlaces al azar, lo que conlleva a la obtención de algunos oligosacáridos como maltosa, maltotriosa (unidades estructurales del glucógeno) y con la conversión final de estos a glucosa. Y como sabemos la glucosa es una aldosa con poder reductor por lo que la prueba resulta positiva. Cuanto más acida era la hidrolisis mayor obtención y concentración de azúcar reductor podíamos encontrar, por lo que la coloración era más intensa. Seliwanof: Esta prueba es una reacción para diferenciar cetosas de aldosas; aunque ambas dan la reacción las cetosasas la dan rápido y las aldosas lento. En los resultados obtuvimos una prueba negativa para el tubo con hidrolisis acida con HCl 1N, esto podría ser que no fue suficiente para obtener cetosas que nos permitieran observar el cambio de coloración rápido y por lo tanto una prueba positiva, lo mismo sucedió para el tubo 4 el cual no estaba hidrolizado así que no había unidades de cetosas que permitieran dar la prueba positiva. En tanto para los tubos 2,3, con hidrolisis acida fue positiva, lo que nos indica la presencia de cetosas,

pero mayormente de aldosas pues la coloración se obtuvo a los 12 minutos de calentamiento lo que consideramos un tiempo prolongado y tardado. Para los tubos 5 y 6 los cuales estaban hidrolizados enzimáticamente, arrojaron una prueba positiva aunque menos intensa que la obtenida en la hidrolisis acida; pues en las unidades estructurales del glucógeno obtenidas en la hidrolisis enzimática podría ser la glucosa, maltosa, dextrina y maltotriosa, las cuales son aldosas y de este modo la coloración tardo más en aparecer.

CONCLUSIONES  De acuerdo a los resultados obtenidos podemos decir que el glucógeno es un polisacárido muy ramificado.  La hidrolisis enzimática es específica y la ácida inespecífica.  El hígado almacena glucogeno.  El glucogeno dio positiva para la prueba de molish , negativa para la prueba de biuret y ninhidrina y un color rojo para el lugol BIBLIOGRAFÍA    

Berg, “Bioquímica” (2008), 4ta. Edición, Edit. Reverté. Morrison y Boyd (2000) Quimica Orgánica (5ta. ed.). México:Pearson, pp. 1335-1341. Voet, Pratt (2009) Fundamentos de Bioquímica (2da. Edición). México: Panorámica. Stryer L, Berg JM, Tymoczko JL (2003): “Bioquímica”, 5ª ed. Editorial Reverté (Barcelona, España), pp 577-580.