Deshidrogenasa Lactica

Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional de Ciencias Biológicas Bioquímica y Biología Molecular “Deshidrogenasa láctica (LDH)- NAD+” Juárez Castillón Luis Enrique Moreno Hernández Leonardo Grupo 3IV1 Sección 4

Introducción:

Objetivos:

La energía se manifiesta de diferentes formas (eléctrica, Determinar la actividad de algunas enzimas que participan radiante, química, nuclear) que pueden ser en reacciones de óxido reducción y discutir la importancia interconvertidas casi sin restricciones. La termodinámica de los cofactores y el efecto de algunos inhibidores. estudia la conversión de una forma de energía en otra. En los seres vivos, las conversiones energéticas están Resultados: gobernadas por las leyes de la termodinámica. La primera ley de la termodinámica dice que "La energía TABLA 1. Determinación de la actividad de la del Universo permanece constante". Esto significa que deshidrogenasa láctica . la energía no se crea ni se destruye, pero puede ser transformada. Los seres vivos son sistemas abiertos Obser Color Color Color Color Color que intercambian materia y energía con el ambiente. vación azul azul azul azul azul Cuando en un ser vivo ocurre un proceso determinado, la energía que se pierde o se disipa es igual a la que inicial (refer gana el ambiente. : encia) Las reacciones químicas de óxido-reducción son 2 min ++ + + Azul + aquellas que implican el movimiento de electrones de un . átomo (o molécula) a otro. El átomo (o la molécula) que cede un electrón se oxida; el que lo recibe, se reduce. 5 min +++ ++ ++ Azul ++ Aquellas moléculas que tienen un potencial más positivo tienden a retener electrones, por lo tanto los que tienen 7 min ++++ +++ +++ Azul +++ un potencial más bajo o negativo tienen tendencia a ceder electrones. Las reacciones de óxido-reducción 10 +++++ +++ ++++ Azul +++ llevadas a cabo por las células son catalizadas por enzimas que actúan como intermediarios hasta llegar al min aceptor de electrones que es el oxígeno. 15 +++++ ++++ +++++ Azul ++++ La lactato deshidrogenasa, o LDH es una enzima min + catalizadora que se encuentra en muchos tejidos del 30 +++++ ++++ +++++ Azul +++++ cuerpo, pero su presencia es mayor en el corazón, hígado, riñones, músculos, eritrocitos, cerebro y min ++ + pulmones. Cataliza una reacción redox, en la que el piruvato es reducido a lactato gracias a la oxidación de Discusión: NADH a NAD+. Dado que la enzima también puede catalizar la oxidación del hidroxibutirato, también es Tubo 1. Se llevó a cabo la reacción completa, por lo que conocida como Hidroxibutirato Deshidrogenasa (HBD). tenía que haberse presentado una pérdida del color, ya Participa en el metabolismo energético anaerobio, que el tubo contenía la enzima catalizadora, un agente reduciendo el piruvato (procedente de la glucólisis) para reductor y un aceptor de electrones, la coenzima (NAD+) regenerar el NAD+, que en presencia de glucosa es el por lo que se favorece la oxidación del lactato a piruvato sustrato limitante de la vía glucolítica. observando una decoloración con ayuda del aceite vegetal para mantener una baja concentración de O2. Tubo 2. Al no agregar coenzima NAD+ no existe un aceptor de electrones por lo que no se llevó a cabo la reacción de lactato a piruvato y por ende no hubo decoloración. Sin embargo se esperaría que para este tubo se presentara una decoloración mínima en la parte inferior del tubo, ya que a pesar de que no estaba presente la coenzima, el extracto de la enzima podía contener restos de coenzima por ser crudo, y por ende se podía

observar esta ligera reducción en la parte inferior, cabe destacar que sería únicamente en esta zona ya que hay menor concentración de O2 Tubo 3. Al no agregar un agente reductor (lactato) no hubo reacción y al no existir un sustrato teóricamente no se debe observar ningún cambio de color, sin embargo se observó un ligero cambio de coloración que pudo deberse a que la enzima contenía residuos de lactato a la hora de extraerse al igual que en el tubo 2. Tubo 4. La reacción no pudo llevarse a cabo ya que no contenía la enzima catalizadora, por lo tanto solamente sirvió como tubo de referencia. Tubo 5. En el último tubo se esperaría que se pudieran observar 2 fases, la primera zona parcialmente reducida (parte inferior del tubo) y otra zona totalmente oxidada (parte superior del tubo), este resultado debido a que al no haber agregado el catalizador (KCN), la reacción al ser reversible se encuentra dirigida tanto hacia piruvato como hacia lactato.

Conclusión: La decoloración del azul de metileno capta los equivalentes reducidos, en la por la presencia de alta concentraciones de oxígeno además de la presencia de la enzima no dializada, coenzima y sustrato Considerando que en la muestra de musculo esquelético no hay cambios por bajas concentraciones de oxigeno, que llevan a la no producción de equivalentes reducidos.

Bibliografía: •Voet D., Voet JG (2004) Biochemistry, 3rd Edition. John Wiley & Sons, pps. 818-820 •Melo Ruiz, Virginia. “Bioquímica de los procesos metabólicos” Reverté, México 2006. Pág 160. •Voet, Donald “Fundamentos de bioquímica: la vida a nivel molecular” 2ª edición, Medica panamericana. Buenos Aires, Argentina. Pág 530,564

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