Prueba De La Oxidasa

INTRODUCCIÓN • Fue diseñada originalmente para identificar todas las especies de Neisseria. • Distinguir familia Pseudomonaceae de la familia Enterobacteriaceae

INTRODUCCIÓN • El sistema citocromo, por lo común presente sólo en los microorganismos aerobios 

Permite a estos utilizar el oxigeno como aceptor final de hidrogeno para reducir el oxígeno molecular a peróxido de hidrogeno

FUNDAMENTO • Se basa en la producción bacteriana de una enzima 

Oxidasa intracelular La citocromo oxidasa

FUNDAMENTO • Actúa como un aceptor de electrones en la fase terminal del sistema de transferencia de electrones

Autor Jean F. MacFaddin

REACTIVO EMPLEADO • REACTIVO DE KOVACS 

Diclorhidrado de tetrametil –p-fenilendiamina (TPD) al 1%



Menos toxico y mas sensible que el compuesto dimetil, pero mas costoso

Color lavanda

REACTIVO EMPLEADO • REACTIVO DE GORDON Y MCLEOD 

Clorhidrato de dimetil-p-fenilendiamina al 1.5%



Es mas estable que el tetrametil Solución purpura claro

REACTIVO EMPLEADO • REACTIVOS DE GABY Y HADLEY modificado por Ewing y Johnson 

Reactivo A: 1% de α-naftol + etanol al 95%



Reactivo B: oxalato de dimetil-p-fenilendiamina 1%

Reactivo de indofenol oxidasa

REACTIVO EMPLEADO • REACTIVO DE CARPENTER, SUHRLAND Y MORRISON  Oxalato de p-aminodimetilalanina al 1%

La sal de oxalato no forma un precipitado negro

REACTIVO EMPLEADO 1g del reactivo en 100ml de agua destilada

Calentar con suavidad Transferir a un frasco graduado Dejar reposar 15 minutos antes de usar Conservar en recipiente oscuro

PARA QUE GRUPO DE M'OS SE UTILIZA Identificación de bacterias gramnegativas no entéricas

• Especies de Acidovorax • Especies de Actinobacillus • Especies de Aeromonas • Especies de Agrobacterium • Especies de Brucella • Especies de Campylobacter

PARA QUE GRUPO DE M'OS SE UTILIZA Identificación de bacterias gramnegativas no entéricas

• Especies de Flavobacterium • Especies de Moraxella • Especies de Neisseria • Especies de Ralstonia • Especies de Rosemonas • Especies de Xanthobacter

DIFERENCIACION DE M'OS • Diferenciar Moraxella (+) y Neisseria (+) de Acinetobacter • Aeromonas (+), Plesiomonas shigelloides (+) y Vibrio de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae (-)

DIFERENCIACION DE M'OS • Bacteroides distasonis (+), Bacteroides eggerthii (+) y Bacteroides ureolyticus de otras especies de Bacteroides (-) • Bordetella parapertusis (+) de otras especies de Bordetella

• Vibrio gazogenes (-) y Vibrio viridiflava (-) de otras especies de Vibrio (+)

DIFERENCIACION DE M'OS • Haemophilus aphrophilus (-), Haemophilus paragallanarum (-), Haemophilus parasuis (-) y Haemophilus segnis (-) de otras especies de Haemophilus (+) • Pseudomonas syringae (-), Pseudomonas viridiflava

(-) de otras especies de Psedomonas

MÉTODO DE USO Procedimiento directo en placa • Agregar 2-3 gotas del reactivo directamente sobre colonias sospechosas Procedimiento indirecto en sobre papel filtro • Papel filtro Whatman N° 1 de 6cm², agregar 2-3 gotas del reactivo y colocar encima las colonias sospechosas

MÉTODO DE USO

Figura 01: método directo en placa Fuente: Google imagen

MÉTODO DE USO Discos de oxidasa • Discos húmedos con agua destilada estéril • Colocar sobre el disco colonias sospechosas • Incubar a 35°C por 30 minutos

METODO DE USO

Figura 02: Discos de oxidasa Fuente: Google imagen

MÉTODO DE USO Prueba del hisopo • Bacterias con requerimientos especiales • Reactivo: clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina • Usar hisopo en lugar de asa bacteriológica

• Tomar las colonias y frotar con el papel filtro • Interpretar el papel filtro

MÉTODO DE USO

Figura 02: Método del hisopo en Neisseria gonorreae Fuente: Google imagen

RESULTADOS DE LA PRUEBA Oxidasa positivo

Oxidasa negativo

Observación de color rosado a violeta

Sin cambio de color

Color negro colonias no viables

Puede ocurrir color negro