Prueba De Pyr

LA PRUEBA DE PYR

1. INTRODUCCIÓN PYR es un método colorimétrico rápido para la identificación presuntiva de ciertos grupos de bacterias en base a la actividad de la enzima arilamidasa pyrolidonyl. L-piroglutámico ácido beta-naftilamida se impregna en el disco de prueba o de la tarjeta y sirve como sustrato para la detección de arilamidasa pyrolidonyl. La hidrólisis del sustrato rendimientos beta-naftilamida que se combina con el reactivo de PYR (p-dimetilaminocinamaldehído) para formar un color rosa brillante de color rojo cereza. A las pruebas positivas de PYR permite la identificación presuntiva de estreptococos del grupo A (Streptococcus pyogenes) y el grupo D enterococos. Además, los investigadores han determinado que la actividad PYR es una prueba clave para la diferenciación de algunas especies de Staphylococcus coagulasa negativos y para algunos géneros de la familia Enterobacteriaceae. Es una prueba rápida, utilizada fundamentalmente para la identificación de Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp.

Es útil para la caracterización preliminar de

Streptococcus, Enterococcus y de microorganismos similares a estreptococos. Dentro del Género Enterococcus se obtiene realizando una serie de pruebas bioquímicas basadas en la utilización de distintos azúcares y aminoácidos. 2. FUNDAMENTO La prueba del “PYR” permite la identificación presuntiva de ciertas bacterias en base a la actividad enzimática l-pirrolidonilarilamidasa (PYRasa). Los microorganismos que contienen esta enzima hidrolizan en forma rápida el sustrato presente en los discos y liberan un grupo pirrólico que reacciona con el reactivo cinamaldehído originándose un compuesto de color rosado-rojizo.Constituye una prueba altamente sensible y de utilidad como los discos de Bacitracina 0.04 U (REF B1240427) y la prueba de tolerancia a la sal (REF Enterococos Medio Hipertónico). También se la utiliza junto con la prueba de leucinoaminopeptidasa (Discos de L.A.P. REF B1241424) y los discos de Vancomicina 30 μg (REF B1134027) para la identificación de cocos Gram positivos catalasa negativa no productores de beta hemólisis. Debe tenerse en cuenta que algunas especies de estafilococos (Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus scheleiferi, Staphylococcus

haemolyticus y Staphylococcus intermedius) son generalmente PYRasa positivo, por lo que se puede utilizar esta prueba en su identificación. Reacciona con el reactivo revelador N-N dimetilamino cinamaldehido 3. COMPOSICIÓN -

Discos impregnados con el sustrato pirrolidonil – beta – naftilamida Reactivo revelador: solución de p-dimetilamino cinamaldehído

4. OBJETIVOS: -

Realizar la prueba presuntiva especifica para los estreptococos B- hemolíticos y la

-

mayor parte de las especies de Enterococcus. Diferenciar el Streptococcus pyógenes de otras especies de Streptococcus y de la especie de Enterococcus.

5. PARTE EXPERIMENTAL 5.1. Materiales  Papel impregnado(discos) en una solución de (Pirrolidonil-beta-naftilamina). Listo           

para usar. El envase contiene sílica gel como desecante. Revelador: 1 ml de solución acuosa de p-dimetil-aminocinnamaldehido. Solución fisiológica estéril. Agar Sangre. Agua destilada. Gotero plástico para el agregado del revelador. Placa de petri. Tubos de ensayo Asa. Cronómetro. Baño María. Mecheros

5.2.

Procedimiento  Siembra A partir de un cultivo puro de agar sangre del microorganismo en estudio, del cual se ha identificado que son cocos Gram positivos catalasa negativa, hacer una suspensión densa en 50 Ul de

solución fisiológica estéril y agregar un disco de PYR.  Dejar que los discos tomen temperatura ambiente.

 Tomar un tubo de hemólisis, agregar 0,2 ml de agua destilada y realizar una suspensión bien densa, tomando 3 ó más colonias del cultivo puro.  Colocar en baño María a 37ºC y agregar 1 disco de PYR-Enterococos.  Agitar el tubo teniendo la precaución de que el disco quede sumergido en la suspensión. Mantener a 37ºC durante 30 minutos.  Luego agregar una gota de la solución Reveladora y observar el cambio de color del disco, durante 5 minutos. 

Incubación En aerobiosis a 35 – 37°C durante 30 minutos. Cuando se utiliza para diferenciar Staphylococcus, la incubación se debe realizar, según algunos investigadores, en aerobiosis, a 35 – 37°C durante 2 horas.

5.3.

Estabilidad y conservación Los discos Diferenciales PYR-Enterococos son estables hasta la fecha que indica el envase, conservados refrigerados entre 2-10ºC.

5.4.

Muestra No se deben utilizar cultivos mezclados o especímenes clínicos directos, para la realización de la prueba de PYR-Enterococos.

5.5.

Interpretación de los Resultados Agregar dos gotas de reactivo cinamaldehido y dejar a temperatura a ambiente hasta 5 minutos. Observar el color desarrollado:  Positivo: presencia de actividad enzimática pirrolidonilarilamidasa: 

disco color rosado a rojo. Negativo: ausencia de actividad enzimática pirrolidonilarilamidasa: disco y/o solución color amarillo o incoloro.

5.6.

5.7.

Cepas de control resultado  Enterococcus faecalis (+)  Streptococcus pyogenes (+)  Staphylococcus aureus (-) Cuidados  Dejar que el envase tome temperatura ambiente antes de su uso, para evitar condensación de humedad dentro del mismo.  Después de su uso tapar bien y colocar el envase dentro del refrigerador.  No utilizar discos cuyo vencimiento haya expirado.  Utilizar una suspensión bien densa para evitar resultados falsos negativos.

6. BIBLIOGRAFÍA http://britanialab.com.ar/esp/productos/b12/pyraenterococos.htm.Manual de instrucciones Brizuela – lab. J.Clin. Microbiol., 22:772-777, 1985. Ficha técnica de laboratorio Britania.

ANEXOS



Positivo: presencia de actividad enzimática pirrolidonilarilamidasa:



disco color rosado a rojo. Negativo: ausencia de actividad enzimática pirrolidonilarilamidasa: disco y/o solución color amarillo o incoloro.

UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA TEMA:

PRUEBA DE PYR

DOCENTE: Q.F. MARIELLA GUERRERO BENAVIDES.

PRESENTADO POR LOS ALUMNOS: MELISSA OBLITAS CCAHUATA. BRYAN PAÚL TITO CALDERÓN. KATHERINE LAGOS DEZA. KATHERINE RONDON MEDINA. CINTHIA CALDERON RONALD COROPUNA AREQUIPA _ 2016