Universidad Nacional Autonoma De Mexico: Facultad De Estudios Superiores Zaragoza

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA Bioquímica celular y de los tejidos I

Cinética Enzimática de la Invertasa

Integrantes:  Cristóbal Ortiz Manuel.  García Ruiz Carlos Andrés.  Meneses Arroyo Héctor Enrique.  Reyes Escobedo Frida Itzel. Grupo: 1451 Equipo: 2

Objetivos: -

Analizar algunos factores que modifican la velocidad de la reacción que es catalizada por la invertasa.

-

Demostrar la relación lineal entre la velocidad de reacción y la concentración de la enzima presente.

-

Determinar cómo influye el pH del medio sobre la velocidad de una reacción enzimática y su efecto sobre el carácter iónico de la enzima y del sustrato.

-

Demostrar que la temperatura afecta las reacciones enzimáticas.

-

Observar el efecto de la concentración del sustrato sobre la velocidad de la reacción enzimática y determinar Km, Vmáx, por métodos conocidos.

Resultados: 1. Curva estándar de Azúcares reductores

Tubo

Blanco

1

2

3

4

5

6

mL de disolución 0.005 M

0

0.05

0.1

0.2

0.4

0.6

0.75

Concentración (μmol)

0

0.25

0.5

1

2

3

3.75

Absorbancia

0

0.046

0.059

0.101

0.351

0.473

0.792

% R2= 95.9861%

2. Efecto de la concentración de la Enzima

Tubo

Blanco

1

2

3

4

5

mL de enzima 10μmol/mL

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

Concentración enzima (μmol)

0

0.5

1

1.5

2

2.5

Absorbancia

0

0.139

0.223

0.353

0.533

0.642

Azúcar reductor (μmol)

0

0.8875

1.3117

1.9682

2.8772

3.4277

Velocidad (μmol/min)

0

0.1775

0.2623

0.3936

0.5754

0.6855

Efecto de la concentración de la Enzima 0.8 0.7 0.6 Velocidad (μmol/min)

0.69

f(x) = 0.27 x + 0.01 R² = 0.99 0.58

0.5 0.4

0.39

0.3 0.26 0.2

0.18

0.1 0

0 0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

[Enzima] μmol

3. Efecto de pH

Tubo

1

2

3

4

5

6

7

pH

2.5

3.5

4.5

5.0

5.5

6.5

7.5

Absorbancia

-0.011

-0.008

0.004

0.005

0.004

0.002

0.001

Azúcar reductor (μmol)

0

0

0.2058

0.2108

0.2058

0.1957

0.1908

Velocidad (μmol/min)

0*

0*

0.0412

0.0422

0.0412

0.0391

0.0381

*No se consideran en la gráfica

Efecto del pH 0.04 0.04

0.04 0.04

0.04

Velocidad (μmol/min)

0.04 0.04

0.04

0.04

0.04 0.04 0.04 0.04 4

4.5

5

5.5

6

6.5

7

7.5

8

pH

4. Efecto de la Temperatura

Tubo

1

2

3

4

5

6

Temperatura (°C)

0

25

37

50

75

92

Absorbancia

0.0072

0.066

0.068

0.096

0.066

0.017

Azúcar reductor (μmol)

0.2036

0.5082

0.5177

0.6503

0.5082

0.2761

Velocidad

0.0407

0.1016

0.1035*

0.1301

0.1016

0.0552

*No se considera en la gráfica

Efecto de la Temperatura 0.14 0.13 0.12 0.1

Velocidad (μmol/min)

0.1

0.1

0.08

0.06

0.06 0.04

0.04

0.02

0 0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

Temperatura

Tubo

Blanco

1

2

3

4

5

6

7

8

mL de sacarosa 0.35 M

0.5

0.02

0.05

0.12

0.17

0.25

0.5

1

1.25

Concentració n sacarosa (μmol)

175

7

17.5

42

59.5

87.5

175

350

437.5

0

0.13

0.304

0.502

0.508

0.638

0.671

0.549

0.379

0

0.8421

1.7208

2.7207

2.7510

3.4075

3.5741

2.9580

2.0996

Absorbancia

Azúcar reductor (μmol)

100

Velocidad (μmol/min)

0

0.1684

0.3442

0.5441

0.5502*

0.6815

0.7148

0.5916*

0.4199*

5. Efecto de la concentración de sustrato *No se consideran en la gráfica

Efecto de la concentración de Sustrato 0.8 0.7

0.71

0.68

Velocidad (μmol/mL)

0.6 0.54 0.5 0.4 0.34 0.3 0.2

0.17

0.1 0

0 0

20

40

60

80

100

[Enzima] (μmol)

120

140

160

180

200