Mantenimiento De Asepsia En Biorreactores

MANTENIMIENTO DE ASEPSIA EN BIORREACTORES En esta práctica la asepsia se considera como el conjunto de

procedimientos

destinados

a

eliminar

o

retirar

microorganismos de un biorreactor y de todas las tuberías conectadas a él, con el propósito de asegurar que

únicamente estén presentes el o los biocatalizadores.

En consecuencia , la asepsia del biorreactor y de las tuberías asociadas a él, garantizan que los procesos de bioconversión se lleven a cabo sin contaminaciones por microorganismos extraños. Para poder lograr la asepsia del biorreactor y de las tuberías asociadas a él, se deben proponer desde la etapa de diseño, una geometría interna y arreglos de tuberías, que eviten la acumulación de substancias al llevar a cabo el vaciado de ellos.

También, la asepsia se facilita mediante una limpieza efectiva del biorreactor y tuberías, lo que se alcanza al especificar materiales de construcción con un acabado que evite el atrapamiento de partículas solidas con microorganismos. Las partículas solidas eventualmente limitan la transferencia de calor, evitando el calentamiento de los microorganismos a la temperatura de esterilización y por lo tanto, dejándolos viables para generar una contaminación.

PARA LOGRAR LA ASEPSIA EN EL BIORREACTOR Una vez lavado el biorreactor y las tuberías, el biorreactor se llena con medio de cultivo para proceder a la esterilización. Para lograrlo, es necesario el buen funcionamiento del sello mecánico para mantener una presión positiva que evite la entrada de microorganismos. Se requiere el más alto aseguramiento posible de la integridad y eficiencia de remoción del filtro para la esterilización del aire.

METODOS PARA PROBAR LA INTEGRIDAD DE FILTROS Es una prueba practica y validada, que se puede considerar para probar la integridad in situ de los filtros hidrofóbicos para la esterilización del aire. Uno de ellos es la prueba de intrusión del agua. Otra prueba es la de mantenimiento de presión.

OBJETIVO Aplicar las pruebas de intrusión de agua y de mantenimiento de presión para poder probar la integridad de filtros de aire, con los que se garantice la operación aséptica en biorreactores.

MATERIALES Y METODOS Biorreactor. 1.- Biorreactor agitado de 30 ml, equipado con prefiltros y filtros hidrofobicos para la esterilización de aire. Instrumentación: Cronometro Rotámetro Manómetro Termómetro Reactivos: Agua desionizada Isopropanol

PRUEBA DE INTRUSION DE AGUA El principio de esta prueba es que el lado corriente arriva de un filtro hidrofobico se llena de agua y se presuriza, la naturaleza hidrofobia de la membrana porosa prevendra el flujo del liquido a través del filtro hasta que se alcanza la presión de la intrusión. La presencia de poros mas grandes en el filtro será detectada por un flujo creciente debida al agua que atraviesa estos poros.

Figura 1. Principio de la prueba de intrusión de agua. Si el tamaño de los poros es como el tamaño del poro B, el flujo de agua será menor que el flujo correspondientes a poros del tamaño del poro A. La tabla 1 muestra el resultado de una prueba de intrusión de agua para un filtro de membrana de la marca Pall. Los parámetros de la prueba son específicos para cada filtro y deben ser proporcionados por el fabricante.

PRUEBA DE MANTENIMIENTO DE LA PRESION La prueba de mantenimiento de la presión es una forma modificada de una prueba de flujo difusivo, que es la prueba de flujo hacia delante corriente arriba del filtro. Una ventaja de la prueba de mantenimiento de la presión es que también confirman la integridad de a unidad de filtración, incluyendo los sellos de la carcasa.

METODOLOGIA DE LA PRUEBA DE INTRUSION DE AGUA 1.- Instalar el filtro seco. 2.- llenar con agua desionizada el lado corriente arriba del filtro. 3.- Aplicar una presión determinada, utilizando aire. 4.- Dejar pasar 10 min. Para que ocurra la esterilización tanto del flujo como de la temperatura. 5.- Después de la esterilización, medir el flujo de agua. Esto se puede hacer, determinando flujo de agua corriente arriba que es requerido para mantener la presión constante.

6.- Al terminar la prueba, drenar el agua del filtro y de la tubería. 7.- Se carga el filtro y la tubería. 8.- Comparar los resultados de las pruebas de los limites especificados. 9.- Si los resultados están dentro de los limites especificados, entonces el filtro esta listo para usarse.

PRUEBA DE MANTENIMIENTO DE LA PRESION 1.- Mejorar la membrana del filtro con una mezcla de isopropanol agua 60:40(v/v). 2.- Instalar el filtro en la carcasa. 3.- Presurizar la unidad de filtración a una determinada presión. 4.- Aislar la unidad de filtración de la fuente presión y de la tubería corriente bajo. 5.- La difusión del gas atreves de la membrana mojada se mide cuantitativamente como un descenso de la presión después de un periodo de tiempo especificado .

6.- Medir el volumen corriente debajo de la carcasa. 7.- Mantener constante la temperatura del volumen corriente debajo de la carcasa. 8.- Verificar que no haya fugas en el sistema de tuberías corriente abajo. 9.- Comparar los resultados con los valores publicados de la disminución de la presión, los cuales se basan en carcasas estándares con válvulas corriente arriba localizadas tan cerca como sea posible de la carcasa del filtro. 10.-

Si

los

resultados

estan

dentro

de

los

especificados, entonces el filtro esta listo para usarce.

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