Inseminación Artificial En Alpacas Jorge Reyna B

Inseminación artificial en Alpacas Jorge Reyna B.Sc (Hons), Msc (Sydney Uni) http://www.elitealpacabreedingsystems.com/library/ArtificialInsem.pdf

Introducción Desde 1988, cuando ocurrieron las primeras importaciones de la alpaca de Chile, La manada nacional australiana ha estado aumentando rápidamente. La estadística demuestra un crecimiento rápido a partir del 51.953 a las 60.814 (el 17%) a partir 2003 a 2004 (Alpacas australiano La asociación, 2005), y alpacas se está manteniendo Nuevo Gales del Sur, Victoria y Australia occidental. La industria de la alpaca en este país sigue siendo una actividad alternativa, pero atractiva en términos económicos, y tiene el potencial para el desarrollo a largo plazo. Al contrario de las condiciones que prevalecen en los Andes, Australia tiene condiciones ambientales excelentes para la alpaca que cría en términos de pastos naturales y tiempo suave. Hay instituciones y recursos económicos eso se puede utilizar para la investigación y la generación de nuevas tecnologías. Con un plan estratégico de la investigación, será posible hacer la industria más provechosa y atraer a más gente para invertir en la crianza de la alpaca. Las granjas de la alpaca en Australia se sitúan en la región agrícola excelente y hay el potencial de criar animales en las áreas marginales, debido a su capacidad de tolerar condiciones ásperas y variaciones drásticas de la temperatura, para alimentar en los pastos que no son utilizados por los ganados o las ovejas, para tolerar altos niveles de la deshidratación y del inanition, y para tener un efecto menos erosivo 0n el suelo debido a sus cojines el elástico de

fibra.Alpacas

también tiene el potencial de ser utilizado para la producción de carne en Australia como en Perú, debido a su nivel bajo del nivel gordo (5-6%) y bueno de la proteína (21-24%) que es superior a ésa en la carne de vaca (corte 2001). Al largo plazo, cuando la población hace más grande, será ganado alternativo viable.

Australia como líder en la industria de las ovejas tiene la experiencia, la infraestructura, las instituciones, y las tecnologías reproductivas asistidas requeridas para la mejora genética de las manadas de la alpaca. Con el desarrollo de la inseminación artificial, técnicas de la transferencia del embrión, producción in vitro de los embriones (IVP) y inauguración de un programa de mejora genético para los alpacas, será posible desarrollar una casta de la alpaca australiana fina adicional comparable a la alpaca guardada por los incas antes de la conquista en relativamente pocos años. Esto

aumentar la producción y la productividad de la

manada y aumentar nuestras exportaciones y ganancias en el mercado internacional. MEJORA GENÉTICA DE ALPACAS La mejora genética en alpacas es lenta en comparación con los ganados y las ovejas debido a la fisiología reproductiva anormal de la especie, que se limita extrapolación de tecnologías reproductivas de otros animales domésticos. Una de las primeras limitaciones es que los varones alcanzan pubertad en 1 - 3 años y el prepucio adhiere al pene del bálano, haciendo la protuberancia del pene imposible (Pinares y otros. 1985; Fernandez Baca 1993). Esta adherencia se ha encontrado para ser dependiente en concentraciones de la testosterona. Se ha divulgado que en los animales jóvenes (1-2 años) libres de adherencias, ese las concentraciones de

la testosterona era animales en relación con altos sin la separación del

prepucio (Nunez 1994). Hay un potencial de avanzar pubertad en varones con el uso de la testosterona, que necesita ser estudiada, y también de ver si un programa apropiado de la nutrición puede avanzar el lanzamiento de las adherencias del pene del bálano, y con esa pubertad y producción de la esperma. Esto será muy útil para maximizar el uso de los padres de la élite, pues permitirá el comenzar de la actividad reproductiva del varón en una edad temprana. Una segunda limitación se relaciona con la longitud larga del gestational (11.5 meses) (Hafez 2000), que limita el número de crias de un detalle hembra a 8-10 de su vida reproductiva entera. En este caso, el desarrollo multi de la ovulación y el programa de la transferencia del embrión (MOET) en alpacas podrían

ser

deseable para maximizar el uso de las hembras de la élite y mejorar la manada del lado maternal también. Un protocolo de la transferencia del embrión consiste en el uso de las hormonas (FSH, hCG y/o LH) para inducir el crecimiento folicular de folículos simultáneos produciendo ovulaciones múltiples, y de tal modo dando la posibilidad de fertilizar oocytes y de producir embriones de una hembra particularmente valiosa. Este animal usado al superovulate se llama un “donante”. Sobre el superovulation, los embriones obtenidos se transfieren en hembras con el valor genético bajo que llevará el embarazo. Así es posible conseguir a varios el descendiente a partir de una hembra en una tentativa. Llaman los “receptores” y deben ser animales las hembras que llevan los embriones sanos con la buena conformación y ningunas malformaciones reproductivas. La investigación en protocolos, la colección del embrión y la transferencia superovulatory se ha conducido en los camellos (Xing-Xu y otros. 1994;

Skidmore 2004), alpacas

(Palomino 1997; Gomez y otros. 2002; Vaughan 2002)

y llamas (Wilson y

Chapman 1985; Correa 1992; Bourke y otros. 1995; Correa y otros. 1997; Taylor y otros. 2000). En el área del vitrification de embriones la investigación se ha hecho solamente sobre las llamas (Aller y otros. 2002; Von Baer y otros. 2002), sino un protocolo satisfactorio para congelar embriones todavía no ha estado descrito. El problema principal en esta investigación está obteniendo una gran cantidad de embriones que se asignarán a diversos protocolos que congelan. Sería probablemente posible recoger ovarios de mataderos en Perú y poner en un sistema in vitro de la fertilización (IVF) para obtener una gran cantidad de embriones que se utilizarán en varios protocolos que congelan para encontrar el grado óptimo que producirá embriones más viables después de ser congelado y el ser deshelado. La producción in vitro de embriones es un área de la novela en camelids y se ha probado en llamas solamente (Del Campo y otros. 1994; Del Campo y otros. 1994; Ratto y otros. 2004). Algunos los investigadores consideran el punto de vista que hay muchos inmóviles de técnicas básicas de convertirse primero antes de ir para las costosas que no tendrán un uso práctico en un futúro próximo.

Otra inconveniencia que afecta la mejora genética en alpacas es relacionado con la eficacia reproductiva de la manada. No hay parámetros reproductivos para seleccionar a varones aparte de características phenotypical como altura, peso, la conformación, la composición del paño grueso y suave, el tamaño testicular, la libido y el número limitado de los descendientes obtenidos por el acoplamiento natural. Se ha demostrado en la otra especie doméstica esa mayor es la presión de la selección para la producción menos es la capacidad reproductiva de los descendientes. Los animales destinados convertirse en padres podían tener una concentración baja y pobres de la esperma el motility de la esperma y cuando los utilizan para mejorar las manadas podría causar problemas serios en sus descendientes transmitiendo los genes para la fertilidad baja. En las condiciones que prevalecen en los Andes, la pérdida temprana del embrión puede afectar el hasta 60% (Huanca y otros. 2004) de la manada y debido al momento específico del año para los acoplamientos, generalmente a partir de diciembre a marcha, es solamente posible tener uno “cria” per annum. Esto afecta el número de los animales disponibles para reemplazo. En el embrión temprano de Australia se ha divulgado la pérdida, pero no hay estudio oficial. Por otra parte, éste no es tal problema aquí que la hembra tiene otra oportunidad de acoplar y de producir un cria. Resumiendo, la pubertad en 1-3 años, la presencia de las adherencias del peneprepucio, la longitud larga del gestational, el número limitado del descendiente de una hembra particular y la eficacia reproductiva baja hace un programa de mejora genético en alpacas lento. Ése es porqué las técnicas tienen gusto de la inseminación artificial, transferencia del embrión y la producción in vitro de los embriones (IVP) se recomienda altamente para alcanzar un aumento genético más rápido en la manada. VENTAJAS DE LA INSEMINACIÓN ARTIFICIAL Hay varias ventajas del programa de la inseminación artificial (AI) en alpacas. Uno los principales es la posibilidad de uso extenso de los padres de la élite de mejorar

el funcionamiento de la manada nacional que facilita la prueba de progenie. Además, el AI permitirá que el cruzamiento cambie un rasgo de la producción, la voluntad acelera la introducción de la nueva genética, reduce el riesgo de separarse transmitido sexual y de otras enfermedades (piojos, JD), y elimina la necesidad del transporte de animales, reduciendo la necesidad de “acoplamientos móviles”. Finalmente proporcionará una herramienta útil para investigar la fisiología reproductiva como transporte de la esperma en la zona femenina, y capacitation y época de la ovulación en lo referente al depósito de la esperma en la zona. CARACTERÍSTICAS DE LA ESPERMA DE LA ALPACA Como preámbulo, es conveniente describir brevemente el proceso exclamatorio en alpacas. Esta especie tiene una fisiología reproductiva peculiar con respecto a ésa observada en otros animales del campo domésticos. La cópula toma hasta 40 los minutos y las contracciones urethral se distribuyen uniformemente a través de proceso exclamatorio (Lichtenwalner y otros. 1995). En el pasado fue postulado que los alpacas ejaculate en fracciones como los verracos pero él es bien sabido actualmente que el proceso de la eyaculación es constante (Chipana 1997). Si el varón es fértil y se ha utilizado racional, mayor es la época del copulation más la probabilidad allí es de encontrar la esperma en el ejaculate (bravo 2001). El plasma seminal en alpacas es gelatinosa (San Martin y otros. 1968; Garnica y otros. 1993; Pastor 1993; Bravo y otros. 1999; Davalos y Olazabal 2002) y él sostiene la esperma hasta que ocurre la ovulación, poste-cópula de generalmente 24-30 H. (Bravo y otros. 1999) (cuadro 1). La función del plasma seminal gelatinosa sigue siendo desconocido, pero podría ser un medio que protege la esperma hasta que ocurre la ovulación, que es generalmente 24-30 h después de copulation (bravo y Sumar 1989). Otra función del plasma seminal gelatinosa que ha sido se sugiere como medio para sellar la cerviz para evitar que la esperma fluya.

Figure 1: Alpaca sperm is highly viscous, which makes it difficult to obtain a homogenous sample when it is mixed with extender for artificial insemination and/or freezing procedures. detrás del útero a la vagina. La función más interesante del el plasma seminal en los alpacas divulgados recientemente está como inductor de la ovulación. Sesenta por ciento de las hembras tratadas con una dosis de i.m. de 0.8 - 1.0 ml de plasma

seminal ovulated. El mecanismo implicado es desconocido, pero puede implicar a proteína que tiene una acción de GnRH o de la LH que estimule el folículo ovulatory al ovulate (Sapana y otros. 2002). El volumen del ejaculate divulgado era 0.8 a 3.1 ml (Bravo y otros. 1997; Bravo y otros. 2000; Flores y otros. 2002). En nuestros ensayos prácticos preliminares el promedio era 2.57 ml (gama 1 a 6 ml). Ejaculates recogido por el mannequin y la vagina artificial (sistema de pesos americano) contiene espuma en superior debido a la penetración constante del pene permitiendo el aire sobre la esperma (cuadro 2). Una cantidad grande de espuma en la tapa del ejaculate podía rendir un ml adicional de esperma sobre una hora o dos. El color predominante de la esperma varía de blanco levemente lechoso a cremoso y depende de la concentración de la esperma contenida (FernandezBaca 1970; Garnica y otros. 1993; Flores y otros. 2002; Vaughan

2003). En

nuestros ensayos prácticos recogimos la esperma que miraba el blanco cristalino (2 x 106 la esperma ml), cremoso levemente lechoso (74 - 80 x 106 la esperma ml) y lechoso (170 - 220 x 106 la esperma ml). Cuanto concentrada la esperma es, más lechosa la muestra es. Nuestras gamas eran variables en el acuerdo con las gamas divulgadas por otros investigadores (Garnica y otros. 1993; Garnica y otros. 1995; Bravo y otros. 1997; Chipana 1997; Flores y otros. 2002; Vaughan 2003).

Cuadro 2: El tubo de la olección que demuestra un volumen inusualmente alto de ejaculate (6 ml), levemente lechoso con espuma en la tapa (contenida 17 x 106 sperm/ml) recogida en la primera tentativa de Wiston, varón del Hacienda del La, Marulan - NSW.

En relación con a la caracterización morphometric de las esperma-cabezas de la alpaca, adentro alpacas al alto grado del polimorfismo de la esperma en y entre animales

se ha encontrado (Buendia y otros. 2001). Es posible clasificar la

esperma de la alpaca según el tamaño de la cabeza en las categorías siguientes: pyriform, cortocircuito, normal, redondo o largo (cuadro 3). En la otra especie esto se ha identificado como característica que puede ser útil en la predicción de la fertilidad. La investigación adicional necesita ser conducida para aclarar si la morfología de la esperma es importante para fertilidad en alpacas. LIMITACIONES ACTUALES DE LA INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN ALPACAS Hay varias limitaciones al uso del AI en alpacas; uno del más importante es que una técnica confiable para recoger el semen necesita ser desarrollada. Se parece

que el uso de un maniqui y de una vagina artificial (sistema de pesos americano) es la mejor técnica hasta ahora, pero el ejaculate varía dentro del mismo animal y entre los animales también. Otra limitación se relaciona con la longitud del copulation, que va a partir 17 a 43 minutos en los ensayos prácticos conducidos en nuestro laboratorio. Esta época extendida de los medios del copulation debes mantener una temperatura constante del sistema de pesos americano para dar las condiciones que el animal necesita producir un bueno ejaculate. La temperatura del tubo de la colección es importante tan bien como la esperma permanecerá allí hasta el final de la cópula. Éste debe ser 37 el ° C en todas las veces, como 1°C para arriba o abajo puede dañar o aún matar a la esperma. El dispositivo usado en alpacas para recoger el semen no es justo un artificial vagina (Sistema de pesos americano), según lo utilizado por todos los investigadores de la alpaca en el pasado. El concepto necesitó ser el

cuadro 3: Esperma de la alpaca debajo del microscopio. Es posible visualizar normal, redondo, el pyriform y las cabezas largas. Dilusión 1/20

cambiado dar resultados mejores. El dispositivo tiene 3 porciones: vagina artificial, cerviz o cuello uterino, y cuerpo y cuernos finalmente uterinos. Es decir es una

zona reproductiva artificial que de ahora en adelante nombraremos AART (zona reproductiva artificial de la alpaca). La investigación futura necesita subir con un diseño que mejor simule la zona reproductiva femenina verdadera para estimular al varón producir un bueno ejaculate. Los problemas relacionados con el semen de la alpaca son su carácter mucoid único, y motility bajo del concentración de los spermatozoa y bajo en el ejaculate (McEvoy y otros. 1992; Bravo y Johnson 1994; Vaughan 2002). Otros problemas que deben mencionarte son la carencia de las técnicas para almacenar el semen en la forma enfriada o congelada que discutiremos después, la frecuencia del uso del varón y la característica de la ovulación inducida en la hembra. Mirar alrededor la frecuencia del uso de los varones, algunos papeles se ha publicado en el pasado

usando

un

grupo

pequeño

de

animales

en

Perú,

pero

las

recomendaciones pueden no ser útiles para nuestros propósitos. Generalmente hablando, los animales en los Andes tienen condición baja del cuerpo, debido a la alimentación exclusiva en los pastos naturales de la calidad predominante baja. Hay casi ciertamente los componentes genéticos y alimenticios que definirán la frecuencia del uso de los varones, y hay muchos de investigación de ser conducido en esta área bajo condiciones australianas. La ovulación inducida observada en alpacas, como en los otros camelids, puede estar una edición cuando se está utilizando la inseminación artificial. El tiempo que la ovulación ocurre en alpacas se ha estudiado antes (San Martin y otros. 1968) y se ha divulgado para ocurrir 24 h después de acoplar natural bajo condiciones el prevalecer en los Andes. Hay otros informes sobre llamas y camellos pero éstos se pueden tomar como referencias solamente. Se ha descrito antes en otras especies que se consideran los ovulators espontáneos (las vacas y las ovejas), de que la época de la ovulación es influenciada altamente por varios factores como la estación y el photoperiod, casta, edad, la presencia del espolón (en el caso de la oveja),

las diferencias entre las multitudes, la condición del cuerpo y los

protocolos de la sincronización utilizaron. Será necesario realizar un estudio bajo condiciones australianas para determinar la época de la ovulación en los alpacas

que consideran el acoplamiento, los tratamientos de GnRH y del hCG, y época naturales del año también, para medir el tiempo la inseminación con la ovulación y de tal modo consigue tarifas mejores del embarazo.

El ultrasonido de

Transrectal se puede utilizar para este propósito como no invasor técnica que permite la visualización de los ovarios y de otras estructuras, determinando la época de la ovulación por la desaparición del folículo dominante, según lo descrito en la oveja (Reyna 2005). El transporte de la esperma en la zona reproductiva femenina se ha estudiado antes. Divulga disponible confirman que los spermatozoa alcanzan el sitio de la fertilización 6 h después de que copulation en alpacas y permanecen allí para hasta 30 h hasta que ocurre la ovulación y la esperma alcanza el oocyte y ocurre el fecundation. Esto significa que la esperma está adaptada bien para sobrevivir hasta 30 h en la zona femenina. Puede ser un efecto del capacitation en el útero que hace que la esperma sigue siendo potencialmente fértil. Esto se podía relacionar con la consistencia gelatinosa del semen. Sería interesante estudiar este fenómeno porque podría ser una llave a mejorar fertilidad en la inseminación artificial. Resumiendo, la carencia de una técnica confiable para recoger muestras de la calidad constantemente buena, el período largo del copulation, las características únicas de la esperma de la alpaca con respecto a viscosidad, motility bajo y concentración baja, y la naturaleza de la ovulación inducida en alpacas, hace difícil el desarrollo de herramientas biotechnological como inseminación artificial para mejorar las manadas. Debido a las diferencias de otras especies domésticas no es deplorable posible extrapolar tecnologías actuales a los alpacas, que hace la investigación en este campo muy desafiadora. TÉCNICAS DE LA COLECCIÓN DEL SEMEN EN ALPACAS:

Varias técnicas se han utilizado en el pasado para recoger el semen de alpacas. Una de las primeras técnicas usadas era condones del intravaginal (Mogrovejo 1952). El problema con esta técnica era que no consideraba que el depósito de la esperma en alpacas es intrauterino. Copulation de un varón con una hembra que tiene un condón no duró más de 5 minutos y el ejaculate era incompleto. Una segunda técnica usada era electroejaculation (Fernandez-Baca 1970), pero

el

problema era que el semen fue contaminado generalmente con la orina, que afecta motility y puede matar a la esperma, y era agotadora para los animales y podría comprometer la vida reproductiva futura si no conducida cuidadosamente. Otra técnica descrita era el uso de la aspiración de la esperma de la cópula del poste de la vagina (PCSAV) (pastor 1993). Esta técnica fue descrita como simple y económico utilizar para obtener ejaculates de alpacas para estudiar la fisiología del semen, pero el problema era que la muestra fue mezclada con vaginal secreciones que pueden alterar características del semen. No hay deplorable otros informes sobre la técnica. Finalmente, la técnica más última descrita es el uso de un mannequin (hembra simulada) y de una zona reproductiva artificial (AART), que se ha divulgado para ser eficaz recoger muestras de la calidad del semen (Aller y otros. 1997; Chipana 1997; Perez 1997; Bravo 2001; Davalos y Olazabal 2002; Vaughan 2002; Huanca y otros. 2004). El problema con la calidad de la esperma obtenida por esta técnica más última es que varía en y entre los varones, haciéndola dura obtener una muestra de la calidad constantemente buena necesitada para probar diverso congelar protocola. No hay explicación para este problema, pero podría ser relacionado con el diseño del AART y de la necesidad de mejorarla para simular mejor la anatomía de la zona reproductiva de la alpaca. Por otra parte, es no sólo importante seleccionar los animales para la aceptación del mannequin, libido y tamaño testicular, es también necesario evaluar consistencia en la producción del semen. Estudios en el área de congelar de la necesidad de la esperma que una técnica confiable de la colección que garantiza la disposición de razonable ejaculates del proceso experimental.

Los ensayos prácticos demostraron que el entrenamiento del varón a acoplarse con el mannequin es un procedimiento simple. Los animales que no habían sido utilizados para acoplar servicio durante algún tiempo eran afilados en el mannequin que se acoplaba y produjeron ejaculate en la primera tentativa. En cambio, los animales que habían sido utilizados regularmente para los acoplamientos naturales eran renuentes, y ellos necesitaron estímulos audiovisuales bajo la forma de hembra verdadera que era acoplada por un varón cerca cerca. Fue observado con frecuencia que algunos varones tenían dificultades que encontraban la entrada de la vagina. Otros eran incómodos al acoplar al mannequin, manifestado por un movimiento y a veces un retiro constantes del pene

y estando parado para arriba por algunos segundos. Fue notado que

algunos animales fueron asustados del mannequin y separados. Además, fue encontrado que la altura trasera del mannequin era un pedacito bajo para algunos animales, y un pedazo de madera fue utilizado para aumentarlo y para dar el animal de fácil acceso al AART (cuadro 4). Los experimentos anteriores conducidos en nuestro laboratorio señalan a la necesidad de modificar al mannequin, y especialmente al AART, para hacer el animal más cómodo con el proceso de acoplamiento y obtener una calidad mejor del semen.

Los primeros ensayos prácticos demostraron que el mannequin

necesita ser reconstruido, usando un material más suave y probablemente modificando la forma también. Para algunos animales toma tiempo para encontrar la entrada de la vagina y requieren a un operador conducir el pene. Otros animales encuentran la vagina, pero pueden sentirse incómodos, retirar el pene y estirar sus piernas, y después volverse otra vez. Se parece ser una cuestión de entrenamiento también, pero es importante tener un diseño que simule a hembra en la posición del copulation (cuadro 5). También, el aislamiento externo se parece ser escaso cuando la colección se realiza al aire libre, pues el AART va de 45°C al principio de la colección a 37°C en los primeros 5 minutos, a 36.5°C en 10 minutos, a 36°C en 15 minutos y a 35°C en 20 minutos. La manta eléctrica que cubre el tubo de la colección se parece ser eficaz en mantener la temperatura

dentro, guardando la temperatura inicial de 40°C después de 45 minutos, pero cuando fue utilizado al aire libre el 3°C. perdido tubo que recogía. El nuevo diseño se ha construido y es doble aislado (interno y externo) para evitar la gota de la temperatura (cuadro 6). Sería deseable guardar el tubo de la colección en 37°C, pues las temperaturas encima o debajo de esto afectarán el

cuadro 4: Monty que acoplaba Consuelo, un mannequin se convirtió por el Dr. Jane Vaughan en el perno prisionero de la alpaca de Belbourie, parque de Wilton, NSW.

Cuadro 5: Un acoplamiento natural, inspiración para el nuevo mannequin que está probando en nuestro laboratorio.

Cuadro 6: PC el nuevo mannequin en la postura adoptada por la hembra en el acoplamiento verdadero. La PC se ha hecho con un marco de madera y un alambre. Tiene interno aislamiento (fibra - cristal) y aislamiento externo (espuma de alta densidad) para evitar la pérdida de temperatura durante el procedimiento de la colección.

La piel se hace con la alfombra de las lanas y es fácil de quitar para la limpieza conveniente. calidad de la esperma. Otra fuente de la pérdida de temperatura del AART podía ser la válvula del metal. Sería interesante substituir que parte por una parte plástica o la cubre con el aislamiento también. El AART necesita ser modificado. Repaso de la anatomía de la hembra zona reproductiva fue encontrado que la longitud total de la zona es 28-30 centímetro entre las labias y los cuernos uterinos. La longitud del pene está entre 35-40 centímetro (Hafez 2000). Esto significa que el depósito del semen puede ocurrir en el extremo del cuerno uterino. La longitud actual del AART es solamente 25 centímetros que significa que el pene está alcanzando el tubo de cristal de la colección (cuadro 7). Ésta podría ser una causa de la variabilidad de ejaculates en el AART y podría ser más obvia cuando la libido no es alta, causando calidad pobre del semen en colección. Por otra parte, la simulación de la cerviz se está utilizando que es 4 centímetros de largo, cuando la literatura lo describe como 2-3 centímetros de largo. Las revisiones anatómicas de la zona reproductiva de la alpaca femenina describen la cerviz como teniendo 2 los dobleces anulares o espirales irregulares, y es muy importante estimular el pene correctamente para intentar imitar esta característica anatómica. La idea es simular tan de cerca como sea posible la zona reproductiva del femenino para conseguir una muestra que sea igual que cuando ocurre el acoplamiento natural. Es probablemente una cuestión de mejorar el diseño de AART, o podría ser el caso que es a característica normal de la especie para ejaculate la buena y mala esperma de la calidad independientemente del diseño de AART usado. Probablemente hay los animales que exhibir más consistencia en la producción del semen que otras. Esto necesita ser clarificada.

Cuadro 7: Zona reproductiva artificial de la alpaca actual (AART). El trazador de líneas está demostrando en blanco, con el tubo que recoge en el extremo. El aparato entero se envuelve con una manta eléctrica para mantenerla caliente durante la época de la colección, y se cabe dentro del mannequin.

Nuestro laboratorio está trabajando actualmente en el diseño del trazador de líneas. Tenemos 3 tipos que se probarán: el primer es recto todo alrededor con un diámetro de 4 centímetros, el segundo tiene diámetro variable (4 a 1.5 centímetros) con una imitación de los anillos de la cerviz, y finalmente el pasado es recto todo alrededor en 1.5 centímetros de diámetro con una imitación de los anillos de la cerviz. El látex se está utilizando para los trazadores de líneas para el sistema de pesos americano en toros y los espolones para las décadas pero el problema es que puede ser tóxico para la esperma. En el caso de estas especies, debido al patrón exclamatorio corto la esperma apenas siempre

entrar en

contacto con el látex, así que no es un problema. En los alpacas, debido al proceso exclamatorio largo, la esperma estará en contacto con el látex por más de 20 minutos, y ésta causará la muerte de la esperma o de la calidad reducida. El producto alternativo que se parece ser seguro para la esperma es grado médico del silicón líquido (Prosil 8). Este producto viene en dos partes, A y B, que son

necesarias mezclar por peso 100:50 respectivamente. La consistencia es mismo líquido y es necesario pintar los moldes con la mezcla, pero toma demasiado largo para secarse y encontramos que es necesaria poner en un horno en 120° C acelera el proceso que cura. Diez a doce capas para obtener el grueso deseable son requerido. La textura del trazador de líneas hecho por el silicón es muy lisa, extremadamente elástico y pegajoso que se siente como piel verdadera. Resumiendo, varias técnicas para recoger la esperma de alpacas han sido probada en el pasado y el uso de un mannequin cabido con el AART se parece ser la mejor técnica hasta ahora. Todavía hay algunas modificaciones al trabajo encendido para encontrar el mejor diseño que estará tan cerca como sea posible a la hembra verdadera. Dado estas condiciones y entrenamiento apropiado, estamos esperando tener consistencia en ejaculates obtenido de nuestros animales de experimento. ALMACENAJE LÍQUIDO DE LA ESPERMA: El almacenaje líquido de la esperma es una técnica que reduce muerte de la esperma y la degeneración, se puede considerar como inactivación reversible de la esperma, y se ha convertido con éxito en la otra especie doméstica como toros, espolones y verracos. Esto se podía alcanzar usando bajas temperaturas adentro la conjunción con los suplementos que reducen o arrestan el metabolismo de la esperma y de tal modo prolongan su vida fértil. En comparación con esperma congelado-deshelada, la esperma líquida del almacenaje requiere números más bajos de la esperma por la dosis del AI (Vaughan 2003). Con independencia de diluyente, de índice de la dilusión, de temperatura o de otras condiciones del almacenaje que la esperma deteriora mientras que la duración del almacenaje aumenta

(Maxwell y Salamon 1993). Los cambios ocurrieron durante el

almacenaje de la esperma, incluyendo la reducción del motility, la reducción de la integridad de la DNA, y los cambios morfológicos y bioquímicos que afectan fertilidad y pueden causar el embrión mortalidad. Varios suplementos usados en los camelids y la otra especie doméstica fueron examinados en un intento por prolongar la almacenaje-vida del semen de la alpaca en 4°C, pero los mejores

resultados indican que el motility era el 50% en 24 h y después declinado hasta el 45% en 48 h (bravo 2001; Vaughan 2002). Hay muchos inmóviles de trabajo de ser hecho en esta área, considerando la dilusión, la temperatura del almacenaje y la longitud del almacenaje. El almacenaje líquido de la esperma de la alpaca será un acercamiento práctico interesante, reduciendo acoplamientos y la tensión móviles para los animales, y dando la posibilidad de maximizar el uso de uno ejaculate según la concentración de la esperma y el motility de la muestra. EL CONGELAR DE LA ESPERMA: La esperma que congela ofrece las muchas ventajas del almacenamiento de larga duración y flexibilidad del uso (Vaughan 2003). Evaluación y selección genéticas los programas hacen la prueba de progenie posible y son así una herramienta de gran alcance a

alcanzar un funcionamiento mejor de la producción y de la

productividad de la manada nacional. Sin embargo, uno de los problemas principales del uso del semen congelado es ése durante congelar y los procedimientos el deshelar un alto porcentaje de células mueren como resultado de daño a la estructura de la membrana (Quinn y White, 1966). El resto de la esperma, que sobrevivió el sistema de congelación, viabilidad perdida y demostró debilitación de la función (Watson 2000). Lesión durante procedimientos que congelan es debido a la formación de los cristales de hielo intracelulares, que interrumpen los organelles intracelulares (Watson 2000). Por consiguiente, la fertilidad después de que el AI con frozenthawed la esperma sea más pobre que con la esperma fresca, y ésta pueden ser compensadas para usando un mayor número de la esperma en la dosis de la inseminación (Watson 1995). En alpacas, como nosotros mencionamos antes, la concentración baja de la esperma y el motility bajo en su ejaculate hace más duro alcanzar tarifas de fertilidad comerciales sobre la inseminación con la esperma congelado-deshelada. Desafortunadamente, podemos encontrar adentro el futuro que hay los varones excelentes que no serán convenientes para congelar de la esperma debido a la

concentración baja y al motility bajo del ejaculate. Estos animales pueden potencialmente ser utilizados para la producción in vitro de embriones como a la cantidad reducida de esperma viva se requiere fertilizar un grupo grande de oocytes. Sobre la colección de la esperma en los alpacas, debido a la naturaleza viscosa de las muestras es necesario utilizar las enzimas hidrolíticas como el Trypsin o el Collagenase (bravo y otros. 2000) o utilizar el revolvimiento mecánico (Vaughan 2003) para licuefacer la esperma y facilitarla el mezclarse con el suplemento. El suplemento se requiere para proteger la esperma contra choque frío durante procedimientos que congelan. Un bueno

el suplemento tiene las funciones

siguientes: 

Proporciona los alimentos como fuente de la energía.



Protege contra el efecto dañoso de refrescarse rápido.



Asegura el pH será mantenido (almacenador intermediario).



Mantiene la presión osmótica y el balance de electrólito.



Inhibe crecimiento bacteriano.



Aumentos el volumen del ejaculate.



Protege las células de la esperma durante congelar.

Hay diversos tipos de compuestos cryoprotectant como el glicerol, el glicol de etileno y el metanol. Estos compuestos pueden penetrar el citoplasma

de la

célula. El mecanismo de la acción de estos compuestos es descrito por a depresión del punto de congelación. La mayor parte de los protocolos de la preservación de la esperma utilizaron el glicerol, que fue utilizado por primera vez en 1949 por Polge y otros. Para proteger la esperma contra choque frío, la yema de huevo y un surfactant se utiliza, y se ha demostrado que la adición del surfactant mejora poste-deshiela fertilidad en la otra especie doméstica. En el momento que, un protocolo acertado para congelar y esperma de la alpaca el deshelar todavía no se ha descrito y el motility después de deshelar va abajo a

20-40%

(Bravo y otros. 2002; Valdivia y otros. 2003; Vaughan 2003).

Probablemente uno de los problemas principales será la naturaleza viscosa de la esperma de la alpaca, haciéndolo duro alcanzar una mezcla homogénea. Los estudios bioquímicos de la esperma serían

deseable, para desarrollar un

suplemento que dará un motility mejor después el deshelar y de las tarifas de tal modo mejor de fertilidad para el AI. Sería deseable congelar la esperma epididymal de alpacas, como tiene no contiene ninguna plasma seminal para estudiar si las tarifas de la supervivencia son mejores. Si las tarifas de la supervivencia son mejores con la esperma epididymal podría indicar que el problema es el plasma seminal que las marcas él difícilmente para obtener una mezcla homogénea con el suplemento y exponen la esperma al frío choque. INSEMINACIÓN ARTIFICIAL: Antes de que la inseminación artificial (AI) él sea necesaria sincronizar la ovulación en las hembras. Es importante mencionar que los alpacas son ovulators inducidos que significa que el estímulo de la cópula es necesario producir la hormona luteinising (LH) responsable de la ovulación. Alpacas femeninos y llamas presentes períodos de la receptividad de hasta 36 días con los períodos cortos de la no-receptividad que pueden durar 2 días (Hafez 2000). La variabilidad de la receptividad sexual puede ser atribuible al grado de madurez folicular y a la producción del oestradiol, según lo observado en la otra especie doméstica. Cuando la hembra es receptiva, la cópula causará el lanzamiento de la LH y la ovulación ocurrirá 30 h más adelante (Bourke y otros. 1995; Bravo y otros. 1996). La receptividad sexual en la hembra no es siempre indicativa de la presencia de un folículo ovulatory que contiene un oocyte con el alto potencial y la capacidad de desarrollo del embrión normal (Bravo y otros de la fertilización. 1991). Esto es muy importante considerar en los programas de la inseminación donde inducen a las hembras al ovulate con GnRH (Bourke y otros. 1995), hCG (Adán y otros. 1989), LH (Taylor y otros. 2000) o plasma seminal (Sapana y otros. 2002). Es posible que estamos induciendo la ovulación en un folículo que todavía no ha terminado su desarrollo ni ha comenzado posiblemente a regresar, y los resultados pueden

ser viabilidad baja del oocyte y tarifas de fertilidad de tal modo bajas. No había relación significativa entre el diámetro del folículo y la época del poste de la ovulación que se acoplaban (Adams y otros. 1990), que indica eso incluso los folículos no maduros pueden el ovulate al mismo tiempo que los folículos maduros en el acoplamiento natural y probablemente sobre el uso hormonal. Se parece que hay una necesidad de determinar la época óptima para los alpacas de acoplamiento según diámetro del folículo.

Probablemente un tratamiento con

progesterona o progestógenos será necesario inhibir crecimiento folicular y entonces a la hora del retiro de progestógenos todos los animales tendrán una onda folicular sincronizada y será posible predecir el tiempo en que un folículo maduro estará presente. Esto significa que con la inducción de la ovulación por las hormonas exógenas los oocytes lanzados serán más competitivos y éste puede aumentar tarifas de fertilidad sobre el acoplamiento natural o la inseminación artificial. La inseminación artificial en camelids del americano del sur se ha descrito antes vía el recto o la laparoscopia (Calderon y otros. 1968; Fernandez-Baca 1993; Bravo y otros. 1996; Perez 1997; Aller 1998; Huanca y otros. 2004). La inseminación artificial vía el recto se realiza que introduce el lado de la mano izquierda y, sobre encontrar y estabilizar la cerviz, una pipeta se introduce en la vagina y a través de la cerviz. Entonces, cuando se alcanza el útero, una jeringuilla que contiene la esperma está conectada en la extremidad del final de la pipeta y la esperma es el depósito ed en ambos cuernos uterinos (Bravo y otros. 1996). Esto es una técnica simple, pero requiere práctica y paciencia de ser convertido. Las segundas aplicaciones de la técnica

la laparoscopia del técnica y los

animales necesitan ser dados un sedativo. Entonces los animales se colocan en una horquilla con la cabeza abajo en el ángulo 60°. Entonces dos incisiones de la piel se hacen craneales a la ubre en 2 centímetros del linea alba. Una cánula trocar pyramidal se inserta a la izquierda que será substituida por el telescopio y

una segunda cánula trocar se inserta a través de la incisión derecha que es substituida por un fórceps que agarra. Sobre encontrar el folículo dominante (folículo ovulatory), el fórceps que agarra se substituye por una pipeta de la inseminación que contenga la esperma en una jeringuilla en el otro extremo. Finalmente, la esperma se deposita en el cuerno uterino ipsilateral al ovario que contiene el folículo ovulatory (Bravo y otros. 1996).

Las tarifas de fertilidad en

alpacas sobre la inseminación artificial transcervical que usa la esperma fresca varían a partir del 40 hasta el 67% (Bravo y otros. 1996; Bravo y otros. 1999; Huanca y otros. 2004), y en el caso de tarifas de fertilidad congelado-desheladas de la esperma varía a partir del 26 hasta el 37% (Apaza y otros. 2000; Bravo y otros. 2000). Más investigación necesita ser conducida para encontrar la dosis óptima y la época de la inseminación de rendir un embarazo mejor clasifica, pero es también importante considerar el protocolo y las hormonas de la sincronización usados para inducir la ovulación pues éstos podrían afectar transporte de la esperma y capacidad del oocyte.

El futuro allí es muchos inmóviles de

investigación de ser conducido para desarrollar la inseminación artificial en alpacas. Primero será necesario probar al nuevo mannequin que se ha construido para cerciorarse de que mantiene la temperatura del AART y da a varón la oportunidad de expresar por completo su comportamiento de acoplamiento y de tal modo obtener una buena calidad ejaculate. Con este fin el diseño del AART es crucial, pues es la manera que el pene será estimulado para producir una buena calidad ejaculate. Asegurando la colección de un bueno ejaculate en términos de concentración de la esperma y el motility es el punto de partida para desarrollar un protocolo para enfriarse/la esperma de la alpaca de la helada. Es importante probar los suplementos, las épocas y las temperaturas de la esperma procesando, así como el empaquetado y la adición de los suplementos de la novela como las enzimas y los antioxidantes que mejorarán la viabilidad de la esperma sobre deshelar. Los protocolos para la sincronización de la onda y de la inducción foliculares de la ovulación necesitan ser revisados con el objetivo de encontrar la mejor respuesta ovárica, según lo representado por el número de los oocytes viables que se fertilizarán sobre la inseminación artificial. Finalmente, las técnicas

para depositar la esperma en el cuerno y la dosis uterinos de la esperma necesitan ser estudiadas más lejos para conseguir tarifas de fertilidad más altas. Contact details: Jorge Luis Reyna Zeballos 7/520 New Canterbury Rd Dulwich Hill, NSW 2203 Sydney – Australia Home +61 2 956 813 70 Mobile: +61 4 28 ALPACA E-mail: [email protected]

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