Informe De Laboratorio De La Actividad Enzimatica

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTÍN - TARAPOTO FACULTAD DE ECOLOGÍA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL PROGRAMA DE ESTUDIOS DE INGENIERÍA AMBIENTAL

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: DESNATURALIZACIÓN POR CAMBIOS DE pH Y TEMPERATURA

CURSO

:

BIOQUÍMICA

DOCENTE

:

Blgo. Mg. ALFREDO IBAN DÍAZ VISITACIÓN

ESTUDIANTES

:

DÍAZ AGUILAR JEIBER MALUQUIS TAPIA ROIDER PANTA HUAMÁN ANTHONY TORRES RUÍZ ERICK VÁSQUEZ GARCÍA CARLOS

CICLO ACADÉMICO:

2019 – II

Moyobamba, 25 de septiembre del 2019

I.

INTRODUCCIÓN

Las enzimas tienen un pH óptimo de actuación. Cambios de pH desnaturalizan la proteína y, por tanto, inhiben la actividad enzimática. La amilasa salival es una de las enzimas encargadas de la digestión del almidón, concretamente la hidroliza con enlaces α,1-4 entre moléculas de α-glucosa. Es una enzima que se encuentra a lo largo de todo el tracto digestivo de los mamíferos, y que también la producen las glándulas salivares.

II. OBJETIVOS  Conocer el efecto de la temperatura y el pH en la actividad enzimática.  Comprobar la presencia de la catalasa en el hígado de pollo y la papa.  Entender la prueba del Lugol. III.            IV.

MATERIALES Y REACTIVOS Amilasa salival Almidón 1 papa cruda y una cocida 1 hígado crudo y una cocida 4 tubos de ensayo 1 gradilla Lugol 2 vasos precipitados Agua Agua oxigenada o peróxido de hidrogeno (H2O2) Ácido sulfúrico (H2SO4) PROCEDIMIENTOS Experimento 1: Desnaturalización a pH ácido de la amilasa salival  Preparar 2 tubos de ensayo con los siguientes reactivos TUBO 1 Amilasa Salival (escupir un poco de saliva) Luego agregar 2 gotas de H2O

TUBO 2 Amilasa Salival (escupir un poco de saliva) Agregar 5 gotas de ácido sulfúrico (H2SO4)

 Agitar por un minuto los tubos de ensayo y esperar 5 minutos.  Añadir 1 mL de solución de almidón a cada tubo.  Agitar los tubos de ensayo y dejarlos reposar 13 minutos para que transcurra la reacción enzimática.  Luego realizar la prueba del Lugol a cada tubo.

Experimento 2: Desnaturalización de la catalasa por calor  Introducir en un tubo de ensayo un trozo de patata cocida y en el otro un pedazo de patata cruda.  Añadir 1 mL. De H2O2 Experimento 3: Acción de la catalasa del hígado de pollo con el peróxido de hidrógeno o agua oxigenada  Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado cocido y crudo.  Añadir 1 mL de agua oxigenada.  Anotar las observaciones.

V.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN Resultados: Experiencia 1

Tubos de ensayo con muestras de amilasa salival con solución de almidón y H2SO4 (tubo 2) y con H20 (tubo 1)

Se observa la tinción a azul oscuro del tubo 2 (izquierda). El H2SO4 desnaturaliza la enzima inhibiendo su accionar.

Discusión La prueba del lugol permite determinar la presencia de almidón. En este caso, la muestra contenida en el tubo 1 no se tiño del color característico que genera esta prueba, azul o púrpura profundo. Esto se debe a que, al transcurrir el tiempo la amilasa salival fue degradando las moléculas del almidón, es por ello que en esta prueba dio un resultado negativo, evidenciando el accionar de la enzima con su respectivo sustrato. Por otra parte, en el tubo 2 se agregó H2SO4, reactivo que cambio el pH de la muestra, desnaturalizando la enzima. Es por ello que, en esta ocasión, si se evidenció la tinción a azul, puesto que la enzima perdió su función de degradar el almidón, dejándolo intacto. En este caso la prueba del Lugol salió positiva.

Resultados: Experiencia 2

Muestras de papa cruda y papa cocinada.

Al añadir el agua oxigenada (H202) se observa la liberación de oxígeno, en forma de burbujas, en el tubo con la papa cruda (izquierda). En la papa cocida, no.

Discusión La catalasa de la papa es una Peroxidasa, es decir, es una enzima que degrada o descompone el peróxido de oxígeno (H202) en oxígeno y agua. En esta experiencia se pudo comprobar que, en la papa cruda, la catalasa llevo a cabo su función, degradando el H202 en sus dos componentes siendo muestra de ello el burbujeo abrupto de la muestra, dando a entender la liberación de oxígeno.

H202 + Catalasa ------> [E+S] + H20 + 02 Ecuación enzimática de la catalasa Distinto a ello, en la papa cocida, está reacción no se llevó a cabo. Esto es debido a que las proteínas se desnaturalizaron al aumentar la temperatura. Al estar desnaturalizadas dichas enzimas pierden completamente su función catalítica.

Resultados: Experiencia 3

Muestras de hígado crudo y cocido.

Se observa un burbujeo intenso en la muestra de hígado crudo, dando a entender el desprendimiento de oxígeno por acción de la catalasa del hígado.

Discusión Muy parecido a la experiencia anterior con la papa, la peroxidasa del hígado crudo al contacto con el peróxido de hidrógeno rompe la molécula liberando oxígeno; durante esta reacción se observa que salen burbujas. Como todas las enzimas son proteínas, sufren desnaturalización frente a temperaturas muy elevadas, por lo tanto, su sitio activo también se desnaturaliza y no puede cumplir su función. Es por ello que, al utilizar el hígado de pollo cocido, no veremos reacción alguna de la enzima peroxidasa.

VI.

CONCLUSIONES  La prueba del Lugol nos permitió reconocer la acción de la enzima, puesto que una tinción de la muestra explicaba que la enzima no degradaba su respectivo sustrato, por lo que dicha proteína se desnaturalizó.  Se ha conocido el efecto que tiene el cambio brusco en el pH y la temperatura en la actividad enzimática, pues desnaturalizan la enzima e inhiben toda actividad catalítica que estos puedan llegar a realizar.  Se ha comprobado la presencia de peroxidasa en la papa y el hígado al observar el desprendimiento de oxígeno en forma de burbujas, función que dichas enzimas realizan al degradar peróxidos.

VII.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Martínez. (1 de julio de 2015). Hígado de pollo y peroxidasa. Obtenido de Club ensayos: https://www.clubensayos.com/Ciencia/Higado-De-Pollo-YPeroxidasa/2618318.html

VIII.

CUESTIONARIO

1. ¿En qué tubo da positiva la prueba de Lugol?, ¿en cuál negativa?, ¿Por qué?  En el tubo 2 (amilasa salival con solución de almidón más H2SO4) dio positiva. Esto es debido a la presencia del almidón el cual la enzima no pudo degradar, ya que se desnaturalizó frente al cambio de pH que el ácido sulfúrico generó. Por ello se tiño de color azul.  En el tubo 1 (amilasa salival con solución de almidón más agua) dio negativa. Puesto a que el almidón se degrado por la presencia de la enzima, el cual no sufrió ninguna alteración, es por ello que este tubo no se tiño del color azul.

2. ¿Qué indica la falta de desprendimiento de 02 al añadir H202 a la papa cocida? La nula actividad de la enzima catalasa. La papa fue previamente cocida, esto es, fue sometida a temperaturas muy elevadas. Esto provocó la pérdida de estructura de la enzima (desnaturalización), respuesta a ello el cese de toda actividad catalítica que esta pueda realizar. Es por ello que en esta muestra no se evidenció el desprendimiento de burbujas de oxígeno, ya que esta no pudo degradar el peróxido en sus dos componentes.