Tincion De Gram (1) (1)

TINCIÓN DE GRAM LABORATORIO 4 Arias Romero Tania Lizeth Rangel Morales Verónica Denise

LABORATORIO 3 López Grifaldo Lizbeth Perea Alcalá Fernando Rosales Vázquez Maria Luisa

INTRODUCCIÓN •Fue desarrollada por Hans Christian Gram en 1884. Es utilizada para agrupar las bacterias en Gram positivas y Gram negativas dependiendo del grosor de su pared celular.

INTRODUCCIÓN. Gram comenzó a experimentar nuevos colorantes y por accidente y azar, se percató de que ciertas bacterias encontradas en tejidos pulmonares de pacientes fallecidos por neumonía retiene el colorante (cristal violeta) después de lavarlas con alcohol.

TINCIÓN DIFERENCIAL En esta tinción se utilizan dos colorantes contrastantes (primario y secundario) y un decolorante de por medio que nos permite diferenciar grupos de bacterias de acuerdo a su reacción con los colorantes.

OBJETIVOS • • •

Conocer el concepto de la tinción de Gram y su importancia. Llevar a cabo la tinción de Gram con especies bacterianas conocidas. Observar el efecto de la variación del tiempo al efectuar la decoloración con alcohol - acetona.

FUNDAMENTO Capacidad de una bacteria de retener o no el colorante primario (cristal violeta) aún después de una decoloración con alcohol acetona, dependiendo del grosor de su pared celular y de su composición química.

GRAM + La pared celular de la célula Gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano así como de algo de ácido teicoico. El componente principal es la mureína, un peptidoglicano que solo se encuentra en los procariontes.

GRAM El espesor de la pared celular de una bacteria Gram-negativa es considerablemente menor a la de una Gram-positiva. Está formada únicamente por peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos y lipoproteínas.

FUNDAMENTO CRISTAL VIOLETA El cristal violeta es básico (se une a componentes celulares de carga negativa). Atraviesa la envuelta celular y se acumula en el citoplasma. Los constituyentes protoplamáticos de las bacterias Gram + y Gram – se combinan con el cristal violeta por un enlace iónico entre sus grupos ácidos y sus grupos básicos del colorante.

FUNDAMENTO MORDENTE (LUGOL) Incrementa la afinidad del colorante primario con la célula formando un complejo de mayor tamaño llamado clatrato o laca. El complejo tiene mayor afinidad por el sustrato que el colorante por sí mismo. Esto incrementará aún más en las Gram positivas que en las Gram negativas.

FUNDAMENTO En la decoloración, el alcoholacetona deshidrata a las bacterias Gram-positivas por que tienen una pared celular muy gruesa y se cierran los poros de ésta e impide la salida del complejo cristal violeta-yodo.

En las bacterias Gramnegativas el alcohol penetra rápidamente en la capa externa que es rica en lípidos y el complejo se extrae fácilmente.

FUNDAMENTO Factores que afectan el resultado de la decoloración: •Edad del cultivo. •Condiciones del cultivo. •Intensidad de la decoloración con alcohol.

FUNDAMENTO SAFRANINA Molécula cargada positivamente (catión) capaz de recombinarse con elementos celulares de cargas negativas. Las bacterias Gram - se teñirán de rosa posterior a la decoloración, las cuales pierden el colorante cristal violeta por efecto de la decoloración.

MÉTODO Y DESARROLLO

RESULTADOS

Escherichia coli

Bacillus megaterium y Escherichia coli

RESULTADOS

Staphylococcus aureus

RESULTADOS

Bacillus megaterium y Escherichia coli FALTA DE DECOLORACION

Staphylococcus aureus FALTA DE DECOLORACION

RESULTADOS

Staphylococcus aureus SOBRE DECOLORACION

Bacillus megaterium SOBRE DECOLORACION

RESULTADOS

Bacillus megaterium

Staphylococcus aureus

FROTIS CON MUESTRA EN EXCESO Y SOBREDECOLORACION

FROTIS CON MUESTRA DEFICIENTE Y SOBREDECOLORADA

CUESTIONARIO • 1. ¿Qué importancia tiene la técnica de coloración de Gram en la identificación de las bacterias? Es de gran importancia, ya que permite, de acuerdo con la estructura y grosor de la pared bacteriana, agrupar las bacterias en Gram positivas y negativas. Y así poder saber su resistencia a diversos factores y a antibióticos.

CUESTIONARIO • 2. ¿Cuál es el paso crítico en la tecnica de coloracion de Gram? Diga por qué. La decoloración ya que si hay una sobre extracción del colorante puede haber variaciones en los resultados de los gram positivos ,al igual que si la decoloración es deficiente los Gram negativos no se teñirán con el colorante secundario adecuadamente.

CUESTIONARIO

• 3. Diga el nombre de 3 bacterias Gram positivas y 3 de Gram negativas. GRAM POSITIVOS

GRAM NEGATIVOS

Streptococcus pyogenes

Klebsiella pneumoniae

Streptococcus pneumoniae

Salmonella typhi

Clostridium tetani

Neisseria gonorrhoeae

Tratado de Microbiologia, Davis, Dulbecco, Eisen, Ginsberg,Wood, SALVAT, segunda edicion 1978

BIBLIOGRAFÍA • •

Tortora Gerard J., B. R. (2007). Introducción a la microbiología. Buenos Aires, Argentina: Ed. Médica Panamericana. Volcy, C. (2004). Lo malo y lo feo de los microbios. Colombia: Univ. Nacional de Colombia.